Диагностика спида иммуноблотом на вич

Линейный метод

Принцип иммуноблоттинга включает:

1. Использование нативного вирусного вещества ВИЧ-формат или антигенов в формате Western -Blot.
2. Соединение белков ВИЧ с отдельными антителами, выявленными в сыворотке крови.
3. Процесс инкубации, происходящий с добавлением меченных антител к человеческим Ig.
4. Расшифровку окрашенных полос.

Анализ позволяет врачу своевременно провести интерпретацию результатов исследования. Положительный блот расшифровывают как 2ENV+/- GAG+/POL, неопределенный — 1 ENV+/- GAG+/POL. Отрицательный результат предусматривает отсутствие полос.

Для выполнения анализа применяют рекомбинантный и лизатный иммуноблот. Исследование является специфичным и составляет 99,5%.

Может ли результат анализа быть расшифрован как ложный, интересуются больные. Полученные данные могут быть сформированы в результате стимуляции защитных сил организма (беременности, гемодиализа). При подозрении на острый ретровирусный синдром и контакт с больным ВИЧ-инфекцией пациенту рекомендуют сдать сыворотку на реакцию ПЦР. Повторное серологическое исследование подтверждается путем измерения вирусной нагрузки в представленном образе биологического материала.

Бывают ли ложноотрицательные результаты?

В редких случаях анализ на антитела показывает отрицательный результат, хотя на самом деле человек уже инфицирован. Происходит это, как правило, в «период окна», когда вирус уже проник в организм, но иммунная система на него среагировать не успела, антитела пока еще не выработались. При гепатите C этот промежуток времени обычно составляет 4–6 недель.

Антитела не выявляются у людей с сильно ослабленной иммунной системой, например, у больных ВИЧ.

Ложноотрицательные результаты опаснее ложноположительных. При положительном результате теста на Anti-HCV перепроверку при помощи ПЦР производят всегда, а при отрицательном, скорее всего, её никто проводить не станет. Если результат был ложноотрицательным, и человек на самом деле болен, высока вероятность, что он снова попадет к врачу и сдаст анализы, лишь когда появятся выраженные симптомы. Лечение будет начато с опозданием.

В большинстве случаев (85–90%) правильный, достоверный результат удается получить на этапе скрининга. Гепатит C — серьезное заболевание, его не случайно называют «ласковым убийцей». Со временем он может привести к циррозу и раку печени. Если вы входите в группу повышенного риска — сдайте анализ, проверьтесь.

Резюме интерпретации тестов на антитела против SARS-CoV-2 (серологические)

Тесты	Положительный результат	Отрицательный результат
	ПОСЛЕ COVID-19
P-тело p/SARS-CoV-2 IgM полуколичественно (направлены против S-белка)	Указывает на раннюю или активную стадию инфекции SARS-CoV-2	Отсутствие контакта с вирусом или серологическое окно*, или отсутствие образования антител организмом
P-тело p/SARS-CoV-2 IgG полуколичественно (направлены против  N-белка)	Указывает на то, что заражение SARS-CoV-2 произошло в прошлом, по крайней мере, несколько недель назад.	Отсутствие контакта с вирусом или серологическое окно*, или отсутствие образования антител организмом
P-тело p/SARS-CoV-2 IgG и полуколичественный IgM (IgM направлен против белка S, IgG направлен против белка N)	Указывает на прошлую инфекцию или текущую инфекцию	Отсутствие контакта с вирусом или серологическое окно*, или отсутствие образования антител организмом
	ПОСЛЕ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ COVID-19
P-тело p/SARS-CoV-2 IgG  количественно (оценка поствакцинального иммунного ответа) (направлен против rbD белка S коронавируса)	Определяет уровень защитных антител IgG против вируса SARS-CoV-2, вырабатываемого в результате вакцинации	Защитные антитела IgG против вируса SARS-CoV-2 не были выработаны в результате вакцинации**

* Период, необходимый инфицированному организму для выработки антител, направленных против возбудителя – в этот ранний период инфекции антитела еще не обнаруживаются.

** Можно провести клеточный ответ.

Негативный результат

В случае недостатка положительных линий, соответствующих белкам вируса СПИДа, иммуноблот расшифровывают как отрицательный результат. Анализ однозначно подтверждает отсутствие заражения вирусом иммунодефицита или указывает на «период окна». Если иммуноблот дает отрицательный результат, человек не является носителем вируса СПИДа.

Для исследования берут образцы сыворотки крови ВИЧ-инфицированных пациентов. Их хранят в замороженном виде при температуре -20°С. Анализ проводят с помощью тест-систем:

• Антиген;
• Рекомбинат-ВИЧ;
• Пептоскрин.

Регистрация отрицательного результата указывает на отсутствие в сыворотке антител к оболочечным гликопротеинам ВИЧ gp120, gp160, Sp41.

Нередко больного интересует вопрос, может ли быть отрицательный результат иммуноблота на ВИЧ у пациента, имеющего инфицированного сексуального партнера. После проведенного исследования нередко получают сомнительный результат или фиксируются антитела к белкам gp120 и gp160, что указывает на полное отсутствие отрицательных данных. Иногда сомнительный ответ регистрируют у пациентов с бессимптомно протекающей инфекцией.

Неинтерпретируемые результаты

Анализ, проведенный с помощью различных тестов на антитела к ВИЧ-инфекции, иногда не соответствует отрицательным данным и не отвечает критериям серопозитивности. Врачу трудно установить причину появления сомнительного результата.

Сыворотку крови пациента необходимо исследовать в динамике. Если в течение 6 месяцев не наблюдают клинических проявлений СПИДа и отсутствуют факторы риска, у больного регистрируют отсутствие инфекции.

Сомнительные результаты анализа получают у пациентов, имеющих низкий риск инфицирования. В некоторых случаях появление неясных данных вызывают содержащиеся в сыворотке крови иммунные комплексы и аутоантитела.

У некоторых больных возникновение сомнительных результатов вызвано развитием патологических процессов:

• инфекционных заболеваний;
• раковой опухоли;
• аллергической реакции.

У больного появляются изменения в клиническом анализе крови, наблюдают рост С-реактивного белка или повышение СОЭ. У людей, страдающих инфекционными заболеваниями, часто выявляют сомнительную реакцию иммуноблота на ВИЧ.

Пациенты с неопределенными результатами не могут являться донорами крови и биологических материалов.

Интерпретация результатов отдельно IgM и IgG

	Положительно	Отрицательно
Антитела IgM	наличие текущей или недавней инфекции	наличие инфекции (ранний период) или отсутствие инфекции
Антитела IgG	наличие текущей или имевшей место в прошлом инфекции	наличие инфекции (ранний период),  отсутствие инфекции или выздоровление при имевшей место в отдаленном прошлом инфекции

Понятно, что ничего не понятно. Одновременно может быть все. Именно по этой причине мы рекомендуем начинать с теста на выявление в крови одновременно IgM и IgG антител. Любым методом: ИФА (кровь из вены) или ИХА (экспресс тест из пальца). При комбинации этих двух показателей все становится гораздо понятнее. 

№ 9. Раздражение кожи.

Если человек жалуется на постоянный зуб и шелушение, кожа сухая и краснеет, ему часто диагностируют дерматит, экзему или нейродермит, отправляя в аптеку за мазью. Причиной кожных высыпаний далеко не всегда становится контакт с бытовой химией. Иногда симптом возникает:

• из-за непереносимости глютена;
• при проблемах с печенью;
• при хронических заболеваниях почек;
• как аллергическая реакция на консерванты в кремах, лосьонах, на ювелирные изделия, никель.

Неправильный диагноз может поставить и ортопед, и дерматолог, и эндокринолог, и любой другой врач

Неправильный диагноз часто становится следствием недобросовестного отношения врача, неполной диагностики. Иногда человеку назначают лечение остеоартроза только лишь по его жалобам на боль в суставах, а на самом деле причина – в больной печени, при этом суставы абсолютно здоровы. Таких примеров – множество, и в лучшем случае ошибка заканчивается только потерей времени, а в худшем – стоит человеку жизни.

Избежать подобных сценариев помогает комплексная диагностика. Не стоит отказываться от сдачи анализов и назначенных обследований, а вместо этого просить у врача «какую-нибудь таблетку». Именно такой подход, а также повальное увлечение самолечением и приводят к тому, что процент неправильных диагнозов растет с каждым днем.

Исследование при беременности

Будущей матери назначают иммунный и линейный блоттинг, если получен положительный результат на ВИЧ методом ИФА. Если блот подтвержден, пациентка больна СПИДом. В этом случае начиная с 14 недели беременности назначают терапию, предупреждающую инфицирование ребенка.

Может ли ошибиться специалист при выполнении исследования сыворотки крови во время беременности, спрашивают пациентки у лечащего врача. Он обязан выдать на руки беременной женщине копии анализов ПЦР, ИФА для устранения сомнений в их достоверности.

При постановке иммуноблота иногда возникают проблемы, но если ИФА, блот и ПЦР — положительные, диагноз ВИЧ-инфекции подтверждается окончательно. Вероятность получения ложноположительного анализа при беременности велика. В случае если ИФА (+), а иммуноблот (-), женщине предлагают пересдать сыворотку крови.

В обменной карте беременной указывают результат исследования. При его положительном значении женщине запрещают кормить ребенка после родов, чтобы не заразить вирусом СПИДа. Окончательные выводы делают на основании лабораторных, клинических и эпидемиологических исследований. Только после их расшифровки больному ставят диагноз «ВИЧ-инфекция».

Какой уровень антител защищает от болезни?

Каждый организм по-разному реагирует на болезнь и введение вакцины, поэтому уровень вырабатываемых антител не одинаков. Их количество может варьироваться от нескольких десятков до нескольких тысяч связывающих антител, т.е. BAU (Binding Antibody Units) на миллилитр (/мл).

Пока ученым не удалось определить уровень (титр) антител к COVID, являющихся нормой, защищающей от заболевания. Однако известно, что их уровень отражает реакцию иммунной системы на вакцинацию.

При интерпретации результата на уровне антител необходимо учитывать принимаемые препараты. Некоторые из них, например, глюкокортикостероиды, иммуносупрессивные и противоопухолевые препараты, ухудшают иммунный ответ. У принимающих их людей обычно вырабатывается меньше антител. 

Со временем на основании результатов научных исследований и статистических данных, уровень антител, выше которого защита от болезни будет почти стопроцентной, будет установлен.

Трактовка тестирования

Опрошенные RT эксперты рассказали, как следует трактовать полученные в результате тестирования данные.

Специалист в области молекулярной биологии, профессор Сколковского института науки и технологий, профессор Ратгерского университета, заведующий лабораториями в Институте молекулярной генетики РАН и Институте биологии гена РАН Константин Северинов пояснил, что антитела указывают не на наличие в организме человека вируса, а показывают реакцию организма на заражение, текущее или уже закончившееся.

«Первой линией защиты является производство противовирусных антител IgM, а затем уже возникает более длительный иммунитет, на основе IgG. У людей, которые дали по IgM положительные тесты, скорее всего, должна быть текущая инфекция, и, следовательно, стандартный тест ПЦР показал бы наличие РНК вируса в их биоматериале. Поскольку у вас такой информации нет и так как испытуемые не имели симптомов, не исключено, что речь шла о ложнопозитивном сигнале за счёт невысокой специфичности антительного теста. Ведь пока неясно, насколько специфичны антительные тесты именно для COVID», — пояснил эксперт в беседе с RT.

Как сотрудники RT сдавали тест на антитела к COVID-19

Похожую точку зрения высказал в комментарии RT молекулярный биолог, доктор биологических наук, профессор, член-корреспондент РАН, заведующий лабораторией биотехнологии и вирусологии факультета естественных наук Новосибирского государственного университета Сергей Нетёсов. Эксперт подчеркнул, что тесты, проводившиеся сотрудникам RT, были ранее одобрены Всемирной организацией здравоохранения.

«В США тоже разработано с десяток тест-систем на антитела, они предварительно зарегистрированы. Но FDA (управление по надзору за качеством. — RT) предупредило, что тесты должны быть испытаны на панели сывороток чётко переболевших и никогда не болевших этим вирусом людей. Например, это должны быть антитела из банков крови на начало 2019 года, сыворотки людей, которые переболели старыми, хорошо изученными типами коронавируса. Кроме того, эта система не должна менять антиген, на котором она построена. Тогда будет ясно, какие заключения можно делать на её основе», — пояснил эксперт.

При этом распространённый тест ПЦР (полимеразная цепная реакция) также не даёт 100%-ной точности, отмечают специалисты. Как пояснил в беседе с RT генеральный директор Института стволовых клеток Артур Исаев, тест ПЦР должен показывать, есть ли вирус на слизистой оболочке человека. Отвечая на вопрос, почему иногда тест ПЦР даёт ложноотрицательный результат, эксперт отметил, что погрешности могут возникать даже на этапе забора материала.

Также по теме

«Позволят изучать препараты»: в России создадут мышей для испытания вакцины от коронавируса

Российские учёные приступили к работам по созданию мышей, чувствительных к заражению COVID-19. В Роспотребнадзоре уточнили, что мыши…

«Потому что некоторые тесты реагируют и работают, когда есть 1 тыс. вирусных частиц. Некоторые — когда 100 тыс. вирусных частиц или 1 млн. Это разные цифры, разная чувствительность. Это первое. Второе — нужно корректно и правильно забрать мазок, чтобы там были вирусные частицы, а процесс этот достаточно неприятный. Плюс РНК вируса достаточно быстро разлагается, поэтому ПЦР-тест и не имеет 100%-ной точности», — сказал он.

«Кроме того, инфекция может не обнаруживаться просто потому, что вируса уже нет на слизистой. Допустим, иммунная система его уже частично поборола и уже борется с его последствиями», — добавил эксперт.

Комментируя результаты проведённого тестирования среди сотрудников RT, заведующий лабораторией геномной инженерии МФТИ, вирусолог и иммунолог Павел Волчков отметил, что антитела IgM обладают довольно слабой активностью.

«Это низкоактивные, незрелые тела. Именно поэтому они работают в таком пентамерном комплексе. И, к сожалению, уровень ложнопозитивного срабатывания IgM достаточно высок. Нужно ещё смотреть на то, какой именно антиген используется. Скорее всего, речь идёт о белке S — спайк-белке, который наиболее обильно представлен на поверхности COVID-19. Но всё равно процент ложноположительных результатов может быть в районе 10—20%. Так что, возможно, если человек у трёх из протестированных и были ложноположительные результаты, то у большинства всё равно антитела действительно имеются», — отметил эксперт.

Ложноотрицательные результаты анализов

Различные методы диагностики демонстрируют различную чувствительность и специфичность в зависимости от формы и стадии сифилиса. Вероятность ошибочного диагноза возрастает, особенно в случаях латентного, скрытого, сочетанного течения заболевания.

Ложноотрицательные серологические реакции на сифилис могут наблюдаться при вторичном сифилисе вследствие феномена прозоны при тестировании неразведенной сыворотки, а также при обследовании лиц с иммунодефицитным состоянием, например ВИЧ-инфицированных пациентов.

Ложноотрицательные результаты серологических специфичес- ких реакций (РПГА), вызванные биологическими факторами, могут быть обусловлены конкуренцией между специфическими IgM и IgG за связывание с антигеном на поверхности эритроцитов, а также «феноменом прозоны». В последнем случае агглютинация не происходит из-за гиперпродукции антител к бледной трепонеме, поскольку каждый антиген-рецептор на эритроцитах из-за избытка антител связан с одной молекулой агглютинина, что препятствует образованию «решетки». Замена РПГА на TPPA, т.е. эритроцитов на синтетические частицы, видимо, исключит или минимизирует получении ложноотрицательных результатов.

В ИФА такие реакции можно объяснить наличием серонегативной фазы при первичном сифилисе, а при вторичном — иммунной недостаточностью, наличием ВИЧ-инфекции. При получении отрицательного результата серологических исследований на сифилис следует учитывать свойство бледных трепонем проникать и размножаться в различных органах и тканях — поиск возбудителя в лимфе (лимфатических узлах) в ряде случаев приводит к достоверному результату. Целесообразно повторить также анализ образцов, давших положительный результат. Повторное, через 5–7 и более дней, исследование сывороток, как правило, позволяет получить достоверные результаты.

Важность клинической диагностики ВИЧ

В понимании многих людей ВИЧ-инфицированный человек выглядит болезненно, изнеможенно. Он кашляет, чихает, чешется, стонет, у него все болит… На самом деле это не так! Проблема в том, что после инфицирования ВИЧ и в последующий инкубационный период симптомы полностью отсутствуют. Затем наступает острая фаза, на протяжении которой присутствуют симптомы, напоминающие ОРВИ или грипп. Но и они вскоре проходят, и наступает, так называемый, латентный период – продолжительный промежуток времени, когда ВИЧ-инфекция себя ничем не выдает. С момента инфицирования и до стадии пред-СПИДа может пройти порядка 10 лет, в течение которых, ни сам пациент, ни его окружение, даже и не подозревают о болезни. А когда она уже на полную мощность заявляет о себе, контролировать ее очень трудно. Сложно противостоять осложнениям ВИЧ, поддерживать практически разрушенную иммунную систему человека.

Очень важно понимать, что, хотя и есть группы риска – гомосексуалисты, наркозависимые и девушки легкого поведения – в основной массе, пациенты с ВИЧ-инфекцией – это обычные люди. Они учатся, ходят на работу, посещают общественные места, знакомятся в интернете – в общем, живут как все

К сожалению, но от ВИЧ никто не застрахован. Незащищенный половой контакт в порыве страсти, заветное тату без соблюдения стерильности, маникюр за полцены у начинающего мастера, уличная драка – все эти и множество других житейских ситуаций могут обернуться инфицированием ВИЧ.

Не ошибается лишь тот, кто не живет! Мы не можем знать все наперед, не можем исправить уже совершенных ошибок, но мы можем предпринять простые шаги для исправления их последствий – обратиться в ближайший кожно-венерологический диспансер, в местную клинику или специализированный СПИД-центр для сдачи анализов и ранней диагностики ВИЧ.

Интерпретация результатов на уровне антител IgG

Тесты на IgG SARS-CoV-2 интерпретируются только с точки зрения их наличия и/или уровня в крови. Можно получить отрицательный или положительный результат. Реактивным (положительным) результатом считается >/= 30 БАУ/мл, нереактивным (отрицательным) результатом — <30 БАУ/мл.

Отрицательный результат теста на антитела IgG свидетельствует об:

• отсутствии контакта с вирусом;
• отсутствии вакцинации;
• неэффективности вакцины;
• серологическом окно — время, необходимое инфицированному организму для выработки антител, направленных против патогена; это также ранний момент заражения, когда антитела еще не обнаруживаются;
• недавнем контакте с возбудителем.

Антитела IgG вырабатываются через некоторое время после заражения и в среднем это период в 2-3 недели, поэтому в начале их может еще не быть.

Положительный результат теста на антитела IgG свидетельствует о том, что:

• в анамнезе была инфекция;
• пациент вакцинирован.

И болезнь, и вакцинация, должны были, имели место некоторое время назад.

Как работает иммунитет к COVID-19 у выздоровевших людей?

Чтобы получить ответ на этот вопрос, рассмотрим механизм иммунитета к коронавирусу. Иммунитет, защищающий организм от заражения COVID-19, связан с наличием в организме антител, специфичных к вирусу SARS-CoV-2 и специализированных клеток иммунной системы. Они запрограммированы на уничтожение вируса при новом контакте.

Антитела – это специфические белки, выработка которых обусловлена клетками иммунной системы. Антитела распознают отдельные структурные элементы патогенов, вызвавших их образование. Они имеют общие фрагменты и небольшие «центры», отвечающие за специфическую реакцию. По общей структурной схеме антитела, присутствующие в организме, делятся на классы.

Таблица 1. Классы антител

IgG

IgM

IgA

IgD

IgE

Специфические физиологические функции связаны с классом антител. Антитела — часть механизма приобретенного, т.е. адаптивного иммунитета.

Для эффективной борьбы с коронавирусом организму необходим именно адаптивный иммунитет, поскольку он позволяет вырабатывать таргетные антитела и Т-лимфоциты, атакующие клетки, инфицированные вирусом. Если адаптивная реакция достаточно сильна, она оставляет постоянную память об инфекции в организме, обеспечивая защиту от вируса в будущем.

Как измерить антитела после прививки?

Препараты «Спутник V», «Спутник Лайт» и «Эпиваккорона» должны вызывать выработку антител к одному конкретному белку — к спайковому (S) белку коронавируса. Поэтому после завершения вакцинации проверять имеет смысл только эти антитела в крови. На выработку других антител эти вакцины не должны влиять никак.

Однако количество IgG к S-белку SARS-CoV-2 может быть высоким и в том случае, если вы раньше болели ковидом или перенесли его бессимптомно. Для чистоты эксперимента можно сдать второй тест — определить антитела к нуклеокапсидному белку. Они будут в наличии только у тех, кто действительно был инфицирован живым вирусом. Если вашу иммунную систему тренировала только вакцина, то антител к нуклеокапсидному белку быть не должно.

Для тех, кто вакцинируется «Эпиваккороной» Роспотребнадзором рекомендована специальная тест-система «SARS-CoV-2-IgG-Вектор».

Вакцина «Ковивак» содержит все антигены вируса, поэтому в ответ на её введение в организме должны вырабатываться те же антитела, что и для защиты от живого коронавируса, поэтому для определения поствакцинального иммунитета можно сдавать любой тест.

Исследование концентрации антител после прививки — дело добровольное. Вы можете отслеживать свои антитела в динамике, сравнивать их с анализами других вакцинированных. Однако никаких нормативных документов, объясняющих, кто лучше защищён, пока нет.

Новости Севастополя

• Минобороны сочло нецелесообразным торговый комплекс в центре Севастополя

• В Севастополе открыли «сезон спасения каякеров»

• Собственник изъятой земли построит новый комплекс на въезде в Севастополь

• Севастопольцев из Ушаковой балки будут возить на пляж в Омегу

• Губернатор Севастополя попросил в Совете Федерации 16 миллиардов на теплосети и водоснабжение

• Толпы севастопольских льготников ночуют под администрацией ради путевки в лагерь

• Незаконно перепланировавшим свое жилье севастопольцам грозит высшая мера

• Засматриваться на море в центре Севастополя опасно

• Власти Севастополя намерены спасти «лавандовые поля» от участи Фиолента

• В центре Севастополя на пожилую женщину рухнула ветка

Метки

Рассеянный склероз
диагностика
аутизм
Материнство
Питание
инфекции
аминокислоты
польза и вред
искуство
медицина
молоко
ожирение
морщины
детская поликлиника
здоровое питание
кардиология
витамины
бесплатно
школьники
анализы
Материнство и Детство
лечение
панкреатит
аллергия
день здоровья
эволюция
больницы
ковид
стресс
Сон
мужчины
коронавирус
COVID-19
дети
онкология
паллиативная помощь
артериальное давление
красота
солнечные дети
гормоны
ПЦР
стоматология
рейтинг
биполярное расстройство
вирус
еда
лор
бессонница
Севастополь
мороз
ортопедия
международный день
молодость
иммунитет
мужское здоровье
РАС
акушерство
туберкулез
ИФА
грипп
СПИД
с бодрым утром
Метеочувствительность
сердце
женское здоровье
зож
лекарства
Спорт
погода
льготы
протезирование
антитела
острый перец
Гипертония
экспресс-тест
синдром Дауна
Беременность
грыжа живота
ангелы
ногти
прививка
вакцинация
бактерии
ВИЧ
холестерин
антибиотик
зарядка
мозг
здоровье
рак
камни в почках
хоспис
статистика
переохлаждение
профилактика
диабет
зрение
БАДы
масло
выставка

Метки

Рассеянный склероздиагностикааутизмМатеринствоПитаниеинфекцииаминокислотыпольза и вредискуствомедицинамолокоожирениеморщиныдетская поликлиниказдоровое питаниекардиологиявитаминыбесплатношкольникианализыМатеринство и Детстволечениепанкреатиталлергиядень здоровьяэволюциябольницыковидстрессСонмужчиныкоронавирусCOVID-19детионкологияпаллиативная помощьартериальное давлениекрасотасолнечные детигормоныПЦРстоматологиярейтингбиполярное расстройствовируседалорбессонницаСевастопольморозортопедиямеждународный деньмолодостьиммунитетмужское здоровьеРАСакушерствотуберкулезИФАгриппСПИДс бодрым утромМетеочувствительностьсердцеженское здоровьезожлекарстваСпортпогодальготыпротезированиеантителаострый перецГипертонияэкспресс-тестсиндром ДаунаБеременностьгрыжа животаангелыногтипрививкавакцинациябактерииВИЧхолестеринантибиотикзарядкамозгздоровьераккамни в почкаххосписстатистикапереохлаждениепрофилактикадиабетзрениеБАДымасловыставка