Для чего нужно сдавать ПЦР-тест на COVID-19?
Этот тест сдается, чтобы проверить, болен ли человек или, возможно, является носителем вируса (даже если у него нет никаких симптомов нездоровья), выделяет ли он в настоящий момент вирус из верхних дыхательных путей, то есть является источником инфекции для окружающих.
Это единственный и ставший уже стандартным тест для туристов: при въезде практически все страны требуют предъявить справку о тесте, сданном перед отъездом. После возвращения из поездки тест придется сдать еще дважды и результат загрузить на портал госуслуг.
Кроме того, можно сдать ПЦР-тест, чтобы убедиться, что вы здоровы, то есть исключить бессимптомное течение заболевания. Это может понадобиться, если, например, вам предстоит встреча с пожилыми родственниками и вы не хотите рисковать их здоровьем. Кроме того, с помощью такого тестирования можно проверить, не заразились ли вы коронавирусом, если вы точно знаете, что контактировали с заболевшим.
Норма для иммуноглобулина G
Для IgG установлены следующие референсные значения:
| Возраст | Пол | IgG, г/л |
| 0 – 1 месяц | Мужской | 3,97 – 17,65 |
| Женский | 3,91 – 17,37 | |
| 1 – 12 месяцев | Мужской | 2,05 – 9,48 |
| Женский | 2,03 – 9,34 | |
| 1 – 2 года | Мужской | 4,75 – 12,1 |
| Женский | 4,83 – 12,26 | |
| 2 – 80 лет | Мужской | 5,4 – 18,22 |
| Женский | 5,52 – 16,31 |
Примечание: следует учитывать, что каждая лаборатория вправе устанавливать собственный диапазон нормальных значений. Сдавать анализы и проходить лечение желательно в одном и том же медицинском учреждении.
Факторы влияния
Существуют факторы, которые могут исказить результаты анализов:
- интенсивные занятия спортом;
- чрезмерный стресс и волнения;
- прием алкоголя или наркотических препаратов, курение;
- длительный прием препаратов для повышения иммунитета;
- прием некоторых лекарственных средств:
- карбамазепин;
- фенитоин;
- метилпреднизолон;
- гормональные препараты (эстроген, оральные контрацептивы);
- вальпроевая кислота;
- препараты золота;
- цитостатики;
- иммуносупрессоры (препараты для искусственного угнетения иммунитета);
- облучение ионизирующей радиацией;
- заболевания кишечника, печени и почек, которые вызывают массовую потерю белков, в т.ч. иммуноглобулинов;
- обширные ожоги кожи.
Оценку состояния общего иммунитета и диагностику патологий целесообразно проводить после комплексного изучения иммуноглобулинов всех классов.
Подготовка к исследованию
Для анализа необходима сыворотка венозной крови. Взятие крови из вены производится в утреннее время (оптимально с 9.00 до 10.00) и строго на голодный желудок (период ночного голодания составляет не менее 10-12 часов). Разрешается пить только чистую питьевую воду без газа. Если процедура забора крови назначена на дневное время, то пациенту можно слегка перекусить, но не позднее, чем за 4 часа до манипуляции.
Накануне анализа необходимо:
- соблюдать диету – исключить острую, жирную, жареную пищу и напитки, повышающие или понижающие артериальное давление (крепкий черный чай, кофе, зеленый чай, энергетики);
- исключить алкоголь, наркотические вещества, лекарственные средства, например, сильные болеутоляющие.
В день процедуры нельзя:
- курить и пользоваться никотинозаменителями (пластырь, жвачка, спрей и пр.) – за 3-4 часа;
- физически и эмоционально перегружаться – за 30 минут.
Особенности диагностики
- Обследование на IgG проводят до начала лекарственных курсов или через 2 недели после их окончания;
- Если нет возможности отменить прием лекарственных препаратов (например, сахароснижающие средства при диабете), пациент обязан заранее проинформировать врача, сообщив ему название медикаментов, дозировку, периодичность приема и продолжительность лечения;
- Венепункция назначается до проведения других диагностических (УЗИ, рентген, МРТ, КТ и т.д.) и физиотерапевтических процедур во избежание получения некорректных результатов исследования.
Другие анализы на оценку иммунитета
- Иммуноглобулин IgE общий
- Иммуноглобулин IgA
- Иммуноглобулин IgM
- Интерлейкины 1, 6, 8, 10
- ФНО (фактор некроза опухоли)
Пациенты
Мы включили в список пациентов с лабораторно подтвержденным COVID-19, которые были госпитализированы в больницы Princess Margaret Hospital и Queen Mary Hospital в Гонконге. В Гонконге пациенты были протестированы на SARSCoV-2 на основе клинических и эпидемиологических критериев, как указано управлением больницы. Первоначальное лабораторное подтверждение было сделано с использованием образцов с носоглотки или мокроты в Лабораторном центре общественного здравоохранения Гонконга. Мы исключали пациентов, если архивных образцов слизи или сыворотки было недостаточно для тестирования.
Это исследование было одобрено Институциональным контрольным советом Университета Гонконга / Администрацией больницы Западного кластера Гонконга. Поскольку использовались архивные образцы, письменное информированное согласие не применялось. Ранее сообщалось о 12 из 23 пациентов, включенных в это исследование, но об их клинических данных, вирусной нагрузке по количественному анализу гена РНК-зависимой РНК-полимеразы-хеликазы, иммунном ответе с образованием антител или анализе вирусного генома ранее не сообщалось.
Как делается тест на антитела?
Для выявления антител в тестах используются антигены — участки с поверхности вируса, с которыми связываются эти самые антитела. Их закрепляют в лунках специальных планшетов, или плашек, а в лунки добавляют кровь пациента. Затем с помощью окрашивания выявляют антитела, которые должны были прикрепиться к антигенам. Если проба меняет цвет, это должно означать, что антитела есть.
Быстрые тесты на антитела, как правило, используются для получения простого результата «да/нет». В них две полоски, как в тесте на беременность. Есть и такие, которые ищут отдельно белки классов M (которые образуются во время болезни) и G (которые остаются в крови после выздоровления). В этом случае в тесте полосок уже три.
Есть и количественные тесты. Они уже позволяют определить не только наличие антител, но и их концентрацию. По ней можно судить и о состоянии иммунитета, и о стадии инфекционного процесса: находится он в острой форме или дело идет к выздоровлению. Для проведения количественных тестов разработчики отталкиваются от устоявшейся нормы антител, которая соответствует разными стадиям.
Процедуры
Для мониторинга вирусной нагрузки всем пациентам было предложено произвести ранний утренний сбор отделяемого с задней стенки ротоглотки (то есть откашляться путем прочистки горла) перед чисткой зубов и завтраком, потому что выделения из носоглотки перемещаются кзади, а бронхолегочные выделения перемещаются при помощи цилиарной активности в заднюю ротоглоточную область при нахождении пациентов в положении лежа на спине во время сна. Пациенты были проинструктированы и контролировались медсестрами. Вирусную транспортную среду добавляли к образцу слюны. Если пациенты были интубированы, мы получали эндотрахеальный аспират вместо слизи с задней стенки ротоглотки. Наш первоначальный опыт показал, что такие образцы являются перспективными для мониторинга вирусной нагрузки у пациентов с COVID-19. Мы также получили остатки сыворотки крови от образцов крови, взятых для рутинных биохимических исследований, и охладили эти образцы до –20 °C до проведения анализа на антитела.
Клинические данные были внесены в предварительно разработанную базу данных, включающую историю болезни и физическое обследование пациента, а также результаты гематологических, биохимических, рентгенологических и микробиологических исследований. Тяжелая форма заболевания определялась в случае потребности в дополнительном кислороде, поступления в отделение интенсивной терапии (ICU) или смерти.
Проведена внутренняя количественная ПЦР с обратной транскрипцией (ОT-кПЦР), нацеленная на область гена РНК-зависимой РНК-полимеразы-хеликазы SARS-CoV-2. Также выполнен ИФА на нуклеопротеин SARS-CoV-2 (NP) и рецептор-связывающий домен шиповидных белков (RBD), как описано, но с модификациями. Рекомбинантный нуклеопротеин (NP) и рецептор-связывающий домен шиповидных белков (RBD) SARS-CoV-2 использовали для ИФА.
Оценена чистота NP и RBD методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия, а также вестерн-блоттингом (рис. 1A, B). Положительный образец был включен в каждый прогон в качестве положительного контроля. В качестве отрицательного контроля использовался архивный анонимный образец 2018 года. В качестве порогового уровня серопозитивности было установлено среднее значение для 93 анонимных архивных образцов сыворотки 2018 года плюс 3 стандартных отклонения. Мы проверили достоверность ИФА с помощью конкурентного ИФА и вестерн-блоттинга, используя образцы сыворотки пациентов (рис. 1C, D).
Проведена реакция микронейтрализации и культивирование вируса. Также проведено полногеномное секвенирование с использованием анализатора Oxford Nanopore MinION (Oxford Nanopore Technologies, Oxford, UK).
Рисунок 1 | ИФА с использованием рекомбинантного нуклеопротеина (NP) и рецептор-связывающего домена шиповидных белков (RBD) SARS-CoV-2
(A) Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия показывает чистоту His-меченого (полигистидин-меченого) рецептор-связывающего домена (RBD) шиповидных белков (трек 1) и His-меченого NP (трек 3). Трек 2 — маркер молекулярной массы белка. Вестерн-блоттинг рецептор-связывающего домена (RBD) шиповидных белков (трек 1) и нуклеопротеина (NP) (трек 2) с использованием моноклональных анти-His антител. Положительный контроль (нуклеопротеин вируса острой лихорадки с тромбоцитопеническим синдромом) в треке №3 и отрицательный контроль (GST-меченый белок) в треке 4 (С). Подтверждающее исследование вестерн-блот нуклеопротеина (NP) с использованием сыворотки пациента. Моноклональные анти-Нis антитела в треке 1, сыворотка неинфицированного пациента в треке 2, образцы сыворотки пациента с COVID-19, взятые в острую фазу заболевания (5 дней после появления симптомов) в треке 3 (титр 1 к 100 ), и на протяжении периода выздоровления (18 дней после появления симптомов) в треке 4 (титр 1 к 3200), трек 5 (1 к 1600) и трек 6 (1 к 8000). (D) Подтверждающий вестерн-блот рецептор-связывающего домена (RBD) шиповидных белков с использованием образцов сыворотки от пациентов с COVID-19. Моноклональные анти-His антитела в треке 1, сыворотка неинфицированного пациента в треке 2, сыворотка двух пациентов с COVID-19 в треках 3 и 4 (титр 1 к 100).NP — нуклеопротеинRBD — рецептор-связывающий доменHis — полигистидин GST — глютатион-S-трансферазаCOVID-19 — коронавирусная болезнь 2019
Результаты
В период с 22 января 2020 года по 12 февраля 2020 года было обследовано 30 пациентов, из которых 23 были включены в исследование (медианный возраст 62 года ). Медианная вирусная нагрузка в слюне c задней стенки ротоглотки или в других представленных респираторных образцах составила 5,2 log10 копий на мл (межквартильный размах (IQR) 4,1–7,0). Вирусная нагрузка в слюне была самой высокой в течение первой недели после появления симптомов и впоследствии снижалась со временем (наклон –0,15, 95 % ДИ –0,19 до –0,11; R2 = 0,71). У одного пациента вирусная РНК была обнаружена через 25 дней после появления симптомов. Пожилой возраст коррелировал с более высокой вирусной нагрузкой (ρ Спирмена = 0,48, 95 % ДИ 0,074–0,75; р = 0,020). Для 16 пациентов с доступными образцами сыворотки через 14 или более дней после появления симптомов показатели серопозитивности составили 94 % для анти-NP IgG (n = 15), 88 % для анти-NP IgM (n = 14), 100 % для анти-NP-IgG (n = 14) IgG RBD (n = 16) и 94 % для IgM против RBD (n = 15). Уровни IgG против SARS-CoV-2-NP или против SARS-CoV-2-RBD коррелировали с титром нейтрализации вируса (R2 > 0,9). В серийных образцах не было обнаружено мутаций генома.
Новый тест на антитела IgG теперь измеряется в BAU
Антитела — это особый вид белка, который вырабатывается иммунной системой человека для борьбы с потенциально опасными агентами. Антитела могут синтезироваться для защиты от бактерий, токсинов и вирусных возбудителей, в том числе и коронавируса.
IgG — это антитела, которые представляют собой «архив», где организм хранит информацию о перенесенной инфекции или вакцинации. Это так называемая иммунологическая память. У разных людей такие защитные антитела сохраняются различное время (от 3 — 6 месяцев и более), так как это зависит от множества индивидуальных факторов.
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) утвердила международный стандарт измерения — First WHO International Stendart for anti-SARS-CoV-2 immunoglobulinum (human), с единицей измерения BAU — «binding antibody units» («единицы связывающих антител»).
Такое приведение к единому стандарту поможет в расшифровке и облегчит текущие исследования иммунного ответа на вирус, связанного с естественной инфекцией, вакцинацией и терапевтическим лечением.
Почему этот тест сейчас считается одним из лучших?
- На сегодняшний день, это наиболее точный и эффективный показатель уровня защиты от коронавируса, который измеряется в BAU.
- BAU — это международная условная единица, показывающая количество антител. Новый стандарт измерения антител признается Всемирной Организацией Здравоохранения.
Медицинский Ди центр начал работать с новыми тест-системами диагностики иммунного ответа на коронавирусную инфекцию. Теперь они стандартизованы относительно Международного стандарта ВОЗ иммуноглобулина против COVID-19. Поэтому результат будет отличаться от того, который выдавали ранее. При оценке напряженности иммунитета уровень специфических антител IgG менее 10 BAU/мл следует расценивать как отрицательный результат.
Каким тестом можно проверить поствакцинальный иммунитет?
Такой тест называется «Количественное определение антител к RBD домену S1 белка коронавируса (антитела IgG)» (выполняется методом хемилюминесцентного иммуноанализа сыворотки и плазмы крови, Abbot).
Это количественный анализ на IgG-антитела. Он поможет оценить иммунный ответ и в случае заражения (или перенесенного COVID-19), и для контроля поствакцинального иммунитета.
Когда делать:
— на текущую или перенесенную инфекцию не ранее чем через три недели после появления симптомов или получения положительного результата ПЦР-теста;
— для оценки поствакцинального иммунитета через три недели после второй дозы вакцины.
О чем говорят результаты:
Антитела: иммунный ответ
Леонид Леонидович, в лаборатории люди получают результаты исследования, естественно, безо всяких комментариев. Их отправляют к врачам. Но к ним сейчас пробиться нелегко, да и не каждый рискует сидеть в очередях. В итоге человек мучительно вглядывается в непонятные обозначения, думает, плохо это или хорошо. Расскажите, что значит: «Антитела обнаружены».
Тест на антитела может показать, сталкивался ли человек с коронавирусом, даже если симптомов COVID-19 у него не было. Если антитела обнаружены, значит, организм среагировал на встреченный вирус. Они могут сохраняться, даже если самого вируса в организме уже нет. Этот тест говорит только о том, что произошел некий иммунный ответ.
Таким образом, выявление антител в крови является информативным свидетельством текущего или прошлого инфекционного процесса и помогает выявить стадию развития инфекции.
Обнаружение IgM указывает на недавнее инфицирование SARS-CoV-2. Они появляются непосредственно после контакта с носителем вируса, на третий-четвертый день. Через семь-десять дней они уже точно присутствуют в крови.
Потом они «стареют»?
Леонид Дьяков: Общий период вероятного выявления антител класса M не превышает двух месяцев. В течение этого времени IgM антитела постепенно полностью сменяются на IgG. Последние начинают формироваться в среднем на 21-й день.
Если еще есть IgM, и уже появились иммуноглобулины класса G, то это означает позднюю инфекцию. Просто IgM еще не сошли на нет.
Получается, наличие IgM не обязательно говорит об активной инфекции?
Леонид Дьяков: Да. Эти антитела могут выявляться и на стадии выздоровления.
Когда в крови выявляются только IgG, это говорит о том, что пациент выздоровел, и у него сформировался иммунитет к SARS-CoV-2. Если уровень IgG достаточно высок, то можно стать донором иммунокомпетентной плазмы. Например, IgG больше 40, а IgM больше 1,5, либо IgG больше 80, а IgM равно нулю.
То есть, если в крови выявлены обе группы антител, это означает, что человек уже выздоравливает?
Леонид Дьяков: Совершенно верно. Еще раз повторю: иммуноглобулины М говорят о том, что человек в данный момент болеет коронавирусом. Это не обязательно тяжелые формы, состояние может быть и бессимптомным. А иммуноглобулины G говорят о том, перенес ли он коронавирусную инфекцию в прошлом.
Далее, в графе «Дополнительная информация», вообще непонятная шифровка. А чем непонятнее, тем ведь страшнее. К примеру, вот передо мной результаты, переданные одним пациентом: «ОПсыв 0,0338; КП 1,45». Что кроется за этим?
От чего зависит количество антител в организме?
Антитела. Что нужно знать
Сейчас это слово у всех на слуху. Но какова роль антител в защите организма? Действительно ли анализ на антитела снимает все вопросы о том, сталкивались ли вы с вирусом? Насколько он точен? Почему антитела могут усугубить болезнь? Читайте в нашем разборе
Коротко
Антитела создаются клетками иммунитета для борьбы с конкретным вредителем: вирусом, бактерией или паразитом.
Они появляются не сразу, потому что организму нужно время на изучение вредителя (патогена).
Чем больше антител, тем сильнее защита. Со временем они могут исчезнуть, но клетки способны создавать их вновь при столкновении со знакомой опасностью.
Вариантов антител для одного патогена может быть много. Тесты могут «увидеть» не все, поэтому их точность не абсолютна.
Вирус может мутировать, и тогда старые антитела не смогут его распознать. Или, распознав, не смогут обезвредить и сами станут его проводниками в клетки.
Актуальность исследования
Мы представляем результаты обсервационного когортного исследования временного профиля вирусной нагрузки при тяжелом остром респираторном синдроме коронавируса 2 (SARS-CoV-2) в образцах с задней стенки ротоглотки, а также выработки сывороточных антител, датированных относительно времени появления симптомов в корреляции с клиническими данными. Выше всего вирусная нагрузка в отделяемом была на протяжении первой недели после появления симптомов и затем снижалась со временем. Иммуноферментный анализ IgG и IgM к внутреннему вирусному нуклеопротеину и рецептор-связывающему домену шиповидных белков показывает корреляцию между титрами антител и титром нейтрализации антител.
Стоит ли всегда доверять результатам тестов?
Результат во многом зависит от набора антигенов, которые использовали разработчики. Если выбранные антигены недостаточно специфичны, к ним прицепятся белки, вырабатываемые в ответ на другие патогены, например, родственные коронавирусы, вызывающие обычную простуду. В этом случае тест дает ложноположительный результат.
Бывают и ложноотрицательные результаты — когда у человека есть антитела к тому антигену, который в тесте не представлен. Например, так бывает с вирусами, которые открыли недавно, как в случае с SARS-CoV-2. Ложноотрицательный результат может быть и тогда, когда кровь взяли слишком рано и в ней еще недостаточно антител.
Почему антитела во время болезни образуются не сразу?
Чтобы создать нужное антитело, иммунной системе сначала нужно изучить нарушителя. Для этого в организме сотрудничают разные «ведомства». Сначала клетки-перехватчики (макрофаги) поглощают и переваривают чужеродные частицы. Затем знакомят с их строением клетки-«лаборатории» (B-лимфоциты). Те, в свою очередь, образуют множество своих копий с разными вариантами «отмычек». Подходящие варианты отправляются на конвейер.
Весь процесс занимает несколько дней, а устойчивый иммунитет достигается за неделю-две. Например, на 14-й день заболевания COVID-19 антитела появляются у половины зараженных, а спустя 20–24 дня — почти у всех пациентов. А тесты на наличие антител к коронавирусу специалисты советуют сдавать только через одну-две недели через одну-три недели с момента возникновения первых симптомов.
Эпидемиологические выводы
Очевидно, что полученную в результате тестирования редакции RT статистику (10% якобы заражённых или заболевших) нельзя экстраполировать на всё население. В противном случае нужно было бы говорить о не менее чем миллионах инфицированных только в одной Москве, отметил Константин Северинов.
Как пояснил Артур Исаев, журналистская работа имеет свою специфику и связана с большим количеством социальных контактов. Поэтому переносить полученные в RT данные на ситуацию в стране не стоит.
- РИА Новости
«Большинство людей всё-таки имеют значительно более низкий коэффициент общения, чем журналисты. Находятся дома и общаются только с близкими людьми», — пояснил эксперт.
На вопрос, можно ли сделать вывод о том, что смертность от коронавируса ниже, чем принято считать, если исходить из полученных RT данных, эксперты также ответили отрицательно.
Эксперт добавил, что смертность также сильно зависит от возрастной группы. Поскольку среди протестированных сотрудников RT большинство — люди в возрасте от 20 до 40 лет, то у них априори риск осложнений был ниже среднестатистического.
«Риски увеличиваются с возрастом. Поэтому пока нельзя делать выводы на основании такой маленькой выборки», — подчеркнул эксперт.