Гепатит — заболевание печени воспалительного характера. Оно вызывается вирусами или веществами с токсическим действием. Болезнь выключает часть функций печени, что даже временно опасно для организма человека. Хроническое течение приводит к циррозу с печеночной недостаточностью, раковой опухоли. Вот почему своевременное выявление с помощью анализов на гепатит так важно для назначения лечения пациенту и мер профилактики окружающим.
Немного статистики
Заболеваемость гепатитом ежегодно во всем мире увеличивается на 20–50%. Наиболее распространены гепатит В и С. Четвертая часть случаев переходит в неизлечимый цирроз или рак печени. 2017 год отличается вспышкой гепатита типа А в Европе.
В России заболеваемость типом А выросла в 2 раза по сравнению с 2016 годом. Максимальное распространение отмечено в Удмуртии, Иркутской, Пермской и Ивановской областях. Роспотребнадзор считает, что для россиян главной причиной является недостаточная вакцинация и низкое качество питьевой воды.
Характеристика вируса и ответных изменений в крови больного
Возбудителем гепатита является вирус, который невозможно выявить в обычной лаборатории. В специализированных вирусологических учреждениях изучены его свойства. Микроорганизм состоит из белковой оболочки. Иногда дополнительно покрыт слоем жира. Внутри клетки находится ее геном или материал, обеспечивающий передачу свойств при размножении и способность к инфицированию.
Он включает цепочки ДНК и РНК. Продукты жизнедеятельности вируса (белки, полисахариды, липиды) для организма человека являются чужеродными. В иммунной реакции они выполняют роль антигенов. В ответ на проникновение вируса гепатита в крови происходит выработка антител. Они представлены иммуноглобулинами:
- свободно циркулирующими по кровеносной системе;
- связанными с клетками В-лимфоцитами.
Задача антител — связывание, уничтожение и выведение из организма чужеродных агентов. Кроме того, они обеспечивают передачу информации последующим поколениям клеток о встрече с нежелательным вторжением.
Изучение анализов крови при гепатите позволило выделить вирусы с разной генной структурой. К каждому из них, вырабатываются свои антитела (маркеры гепатитов). Оказалось, что в клиническом течении и ожидаемом поражении печени тоже есть зависимость от генетического типа вируса. Так, выделены разновидности вирусного гепатита, они названы начальными буквами английского алфавита.
Для выявления присутствия вируса в организме человека самыми доступными являются иммунологические методики на специфические иммуноглобулины или антитела. Их наличие также указывает на степень активности или агрессивности инфекции. Даже чтобы увидеть вирус гепатита под электронным микроскопом в специализированных лабораториях приходится предварительно обрабатывать плазму крови специальной сывороткой с антителами.
Под электронным микроскопом вокруг вируса различается «венчик» из иммунных комплексов, для улучшения видимости его контрастируют раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты
Рассказывая о лабораторной диагностике гепатитов, мы разберем особенности некоторых иммунологических видов диагностирования гепатитов.
Кому необходимо провести обследование на гепатит?
Гепатит опасен длительным бессимптомным периодом. Поэтому обследование на это заболевание необходимо проводить в первую очередь людям, контактирующим с больными или кровью. Конечно, к этой группе относятся медицинские работники, особенно работающие:
- в акушерстве;
- хирургических отделениях;
- процедурных кабинетах;
- на станциях переливания крови;
- стоматологических кабинетах.
К контингентам, обязанным сдавать кровь на гепатит, также относятся:
- беременные;
- доноры крови и органов для трансплантации;
- люди из контактного окружения больного;
- пациенты наркологических и кожно-венерологических учреждений;
- дети из интернатов, домов ребенка;
- люди, которым предстоит любая плановая операция.
Обязательно обследуются на гепатит сотрудники лабораторий, отделений гематологии, гемодиализа
Специальной инструкцией определены заболевания, которые нуждаются в дифференциальной диагностике с атипично протекающим гепатитом:
- все хронические болезни печени;
- туберкулез;
- новообразования.
Обязательно обследуются новорожденные у мам, страдающих вирусным гепатитом. Кратность исследований строго контролируется органами санэпиднадзора.
Как определить гепатит иммунологическими методами?
Выявить характерные антигены, состав иммуноглобулинов антител помогают анализы на маркеры вирусных гепатитов. Их определение проводят:
- в сыворотке крови;
- каловых массах;
- зараженных продуктах;
- воде;
- биоптатах печени.
Состав антигенов в крови при гепатите зависит от длительности инкубационного периода заболевания, срока, прошедшего с момента заражения. Используются различные иммунологические методики диагностики. Все иммунологические методы основаны на выявлении антител или антигенных структур по меченым антителам. Применяются разные модификации.
Иммуноферментный анализ (ИФА) — к сыворотке крови пациента добавляются стандартные антитела, меченные ферментами. Если имеются антигенные структуры вируса, то происходит соединение антигена с сывороточным белком. Прибавление к смеси специального красящего вещества изменяет его цвет пропорционально числу молекул связанного антигена. Таким образом, удается получить количественное отражение реакции.
Вирусная нагрузка в результатах исследований оценивается в международных единицах (МЕ/мл):
- высокой считается показатель — свыше 800 МЕ/мл;
- низкой — ниже 800.
Иммуноблоттинг — более чувствительный метод, сочетает ИФА с электрофорезом. Выявляет антитела и иммуноглобулины. Сначала плазму крови пациента с предполагаемыми антигенами способом электрофореза в гелевой среде разделяют и переносят на специальную бумагу, пропитанную активирующим веществом. Затем наносится сыворотка и проводится электрофорез.
В арсенале вирусологических лабораторий имеются стандартные полоски с антигенами, остается только нанести на них сыворотку из крови пациента
В зависимости от материала исследования различают:
- ДНК-блоттинг;
- РНК- блоттинг;
- белок- блоттинг.
Учет длительности времени сколько делается анализ на гепатит методом иммуноблоттинга показывает колебания от 1–3 часов до 1,5–2 суток в зависимости от поставленной задачи исследования.
Радиоиммунологический анализ (РИА) — отличается от двух предыдущих использованием изотопов для метки одного из составляющих компонентов реакции. Обычно ими являются антигены. Они связываются антителами плазмы. Поскольку количество меченого изотопа заранее известно, то имеется возможность количественного определения антител путем радиометрии проб. Методика высокочувствительна.
Способ полимеразной цепной реакции (ПЦР)
Диагностическое исследование является необходимым, поскольку позволяет выявить даже незначительное содержание ДНК вируса гепатита. Основан на процессе копирования участков ДНК или РНК с генной информацией и составления цепей. Это помогает увеличить количество субстрата для анализа и провести полное исследование типа вируса.
Экспресс-способы
Экспресс-тесты в виде полосок, пропитанных особым веществом, позволяют провести качественную реакцию на маркеры гепатита по капле крови из пальца. Они просты в применении. По отзывам экспертов достаточно надежны для первичной постановки диагноза, требуют всего 15 минут времени для получения результата.
Выпускаются тестовые экспресс-системы для быстрого обследования контингентов
Косвенные методы выявления гепатита
Лабораторная диагностика вирусных гепатитов является основой выявления заболевания. Кроме иммунологических тестов, применяются:
- общий анализ крови — характерно повышение СОЭ, гемоглобина;
- анализ мочи на уробилин — положителен;
- печеночные пробы для выяснения функциональных нарушений работы органа;
- пункционная биопсия печени с проведением цитологического анализа участка печеночной ткани.
Нарушение функции печени сразу проявляется в биохимических исследованиях крови. Поэтому рассуждая какие анализы следует сдать на гепатит, не стоит исключать выявление метаболических нарушений, изменений свертываемости крови, гормонального состава. Они косвенно считаются свидетелями в пользу гепатита.
В анализ крови на гепатит обязательно включаются специфические ферментные пробы печени:
- на аланиновую и аспарагиновую трансферазы;
- щелочную фосфатазу;
- лактатдегидрогиназу;
- сорбитдегидрогеназу;
- гаммаглутаминтранспептидазу;
- гаммаглутамилтрансферазу;
- фруктозо-1-фосфатальдолазу (Ф-1-ФА).
Последние 2 — считаются наиболее органоспецифичными для поражения печени. остальные ферменты могут дать ошибочный результат, поскольку они повышаются и при других заболеваниях:
- при инфаркте миокарда;
- раке печени;
- болезнях поджелудочной железы;
- инфекционном мононуклеозе;
- респираторных инфекциях;
- воспалении легких;
- гастроэнтеритах.
Пациентам назначается развернутая коагулограмма для контроля за свертывающей системой крови и степенью поражения печеночной ткани.
Биохимические показатели крови, подтверждающие функционирование печени:
- тимоловая проба;
- состав и соотношение белков;
- холестерин, липопротеины, триглицериды — отражают нарушения жирового обмена;
- билирубин — показатель синтеза пигментов и работы желчного пузыря;
- протромбиновый индекс, фибриноген — факторы свертываемости крови.
Изменения биохимических тестов не отличаются по тенденции при гепатитах, вызванных разными вирусами:
- повышается аминотрансфераза, аланиновая больше, чем аспарагиновая, при выздоровлении показатели снижаются;
- повышение Ф-1-ФА говорит о тяжести поражения печеночной ткани, этот фермент снижается раньше трансаминаз;
- в моче обнаруживаются билирубин и уробилин;
- тимоловая проба растет в 3–5 раз.
Наблюдается выход в кровь ферментов, прямого и непрямого билирубина. Снижаются альбумины, протромбиновый индекс. Повышен холестерин, триглицериды.
Биохимические показатели крови указывают на разрушение печеночных клеток, нарушение функции органа и изменение всех видов обмена веществ
Рассмотрим диагностику на примерах наиболее распространенных форм гепатитов. Типы E, G и F встречаются редко.
Вирусный гепатит А
Заболевание отличается от других типов способом заражения — только фекально-оральным и острым течением. Инкубационный период длится от двух недель до 1,5 месяцев. Обследованию подлежат все близко контактные люди за этот период. Геном клетки содержит не ДНК, а РНК (рибонуклеиновую кислоту). Соответственно сдавая анализ крови или кала на гепатит, следует ожидать маркеров РНК-структур.
Метод ИФА выявляет характерный антиген вируса А (HAVAg) в исследуемом материале. Он обнаруживается в кале пациентов за 7–10 суток до первых клинических признаков болезни. Титр антител к иммуноглобулину IgM нарастает в острую фазу болезни даже при безжелтушной форме и исчезает спустя 6–8 месяцев. Антииммуноглобулины к типу G не имеют диагностического значения. Способом ПЦР обнаруживается РНК вируса (HAVRNA).
Вирусный гепатит B
Воспаление печени принимает сразу хроническое течение. Не медики пишут «гепатит б». Геном вируса гепатита В образован кольцевидной ДНК. Передается парентерально (не через пищу, руки и загрязненные продукты).
Маркеры определяются как специфическим антигеном, так и выработанными антителами. Иммунологические исследования выявляют:
- HBsAg — австралийский антиген, поверхностный, указывает на острый период болезни, остается после выздоровления;
- Anti-HBs — антитела к австралийскому антигену, выявляются при иммунитете к вирусу;
- HBcAg — антиген из ядерной структуры обнаруживается не в крови, а в тканях печени;
- Anti-HBc — антитела, образованные на ядерный антиген, показывают на степень активности вируса, наличие антител к иммуноглобулину Anti-HBc IgM подтверждает обострение гепатита, высокую заразность крови, а Anti-HBc IgG — более характерен для благоприятного течения;
- HBeAg — белок в составе ядра вируса расценивается, как неблагоприятный признак, но антитела к нему Anti-HBe показывают снижение активности вируса.
Способ ПЦР обнаруживает генетический материал, повышенное содержание в тесте говорит об активном процессе, обострении, понижение трактуется, как ремиссия болезни. Расшифровка анализа должна сопровождаться учетом функциональных печеночных проб.
Хронический гепатит C
Специфичность вируса гепатита С заключается в содержании генной информации, как и у вируса гепатита А, не в ДНК, а в РНК. Это дает ему большую возможности изменяться (мутировать). Для формирования антител и их определения такое свойство вируса представляет серьезное препятствие. Поэтому маркерами являются:
- антииммуноглобулин к типу IgM — подчеркивают острую фазу заболевания, появляется при неэффективном лечении, служит признаком неблагополучия;
- к IgG — подтверждают присутствие вируса, остаются в крови пожизненно;
- HCV-RNA — материал генома вируса, оценивается по результатам ПЦР, даже слабоположительный результат подтверждает наличие вируса в организме.
ВОЗ рекомендует троекратное исследование методом ПЦР на РНК вируса гепатита С. Анализ получил название тест 321. Эксперты полагают, что только троекратное подтверждение при вирусной нагрузке не менее 60 МЕ/мл можно считать достоверной диагностикой даже при отсутствии других маркеров.
Хронический гепатит D
Особенность вируса гепатита D — отсутствие самостоятельности. Он полностью зависит от наличия в организме вируса гепатита B. Но по клиническому течению и заразности он считается наиболее тяжелым. Геном состоит из цепочки РНК, поэтому вирус также мутирует как при гепатите С.
Маркерами обязательно служат:
- перечисленные выше комплексы гепатита В;
- специфический антиген HDAg;
- генетический материал HDV-RNA;
- антииммуноглобулины IgM и IgG.
Мутация происходит за счет замены разных участков неустойчивой цепочки РНК
Какими анализами подтверждается токсический гепатит?
Повреждающими факторами при токсическом воздействии на печень могут быть ядовитые вещества растительного и искусственного происхождения:
- несъедобные грибы;
- ядовитые травы, ягоды;
- производственные вредности (свинец, ртуть, соли тяжелых металлов);
- удобрения;
- лекарственные препараты.
Выявить токсический характер гепатита сложно. Приходится исключать все виды вирусных гепатитов, учитывать анамнез заболевания. Факт воспаления и повреждения печеночных клеток подтверждается биохимическими пробами. Пациентам назначается развернутая коагулограмма для контроля за свертывающей системой крови и степенью поражения печеночной ткани.
Врачи рекомендуют обязательно сдать анализ на гепатит вирусной этиологии с выделением маркеров. Наличие токсинов в крови и моче выявляется специальным токсикологическим исследованием.
Нужно ли готовиться к сдаче анализов на гепатит?
Сдавая кровь на гепатит натощак или нет, человек может повлиять на итоговые результаты исследования. Ведь врач назначит неправильное лечение, используя ложную информацию. Подготовка включает обязательное соблюдение нескольких условий:
- на 2 недели перед сдачей анализов необходимо прекратить прием любых медикаментов;
- нельзя проводить физиопроцедуры, УЗИ, рентгеновское исследование;
- перед днем сдачи анализов необходимо не заниматься интенсивной физической работой и хорошо выспаться;
- в диете следует исключить овощи и фрукты, содержащие каротин (морковь, все плоды и ягоды желтого цвета), алкоголь, соленую, жирную и острую пищу;
- на несколько дней придется прекратить курение;
- женщины не должны сдавать анализ на фоне месячных;
- кровь берется натощак утром, нельзя есть за 10–12 часов до этого момента.
Получая направление в лабораторию, нужно предупредить лечащего врача о сопутствующих заболеваниях, повышенной чувствительности к лекарственным препаратам.
Заранее нужно узнать сколько дней делается рекомендуемый анализ. Разные методики занимают от нескольких часов до 10 дней. Сложности в диагностике требуют ожидания результата. Быстрее можно сделать анализ в специализированных учреждениях и частных клиниках, но это обойдется недешево. Полное обследование позволяет назначить оптимальную терапию и контролировать ход лечения.