Первый отечественный пцр-тест для диагностики малярии зарегистрировали в россии

Как сдать анализ ПЦР правильно: подготовка

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

• Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
• Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
• С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

• Универсальность. Метод дает возможность определить все известные на сегодняшний день микроорганизмы, вне зависимости от вида исследуемого материала.
• Специфичность. ПЦР позволяет определить ДНК вируса или бактерии со 100% точностью, что не дает ни один другой способ диагностики.
• Чувствительность – даже один мельчайший «обломок» ДНК или РНК может быть обнаружен и идентифицирован, благодаря быстрой реакции образования копий.
• Оперативность – поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно уже через несколько часов после забора биологического материала, что дает возможность своевременно приступить к лечению заболевания.
• Возможность проведения количественного анализа. Эта особенность важна при выявлении болезней, вызванных условно-патогенной флорой (например, молочницы). Повышенное содержание грибков кандида  в организме вызывает заболевание, а нормальное количество до 10 3 — 104 КОЕ/тамп. – нет.

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Тесты на выявление коронавируса

Чтобы напрямую подтвердить наличие вируса в организме человека, используется тест на коронавирус ПЦР или тест на антиген. Для тестов, выявляющих наличие коронавируса, у пациента берут мазок, потому что вирус SARS-CoV-2 живет в дыхательных путях.

• ПЦР (генетический) тест на коронавирус. Это самый верный и рекомендованный ВОЗ (Всемирной организацией здравоохранения) анализ, признанный «золотым стандартом» диагностики COVID-19. Этот тест позволяет обнаружить генетический материал (РНК) вируса, присутствующего в дыхательных путях. Тест на коронавирус ОТ-ПЦР очень чувствителен, а значит, позволяет обнаружить наличие вируса еще до появления симптомов заболевания.
• Тест на антиген коронавируса SARS-CoV-2. Это более специфический инструмент, он может подтвердить, вызваны ли уже присутствующие симптомы наличием вируса SARS-CoV-2 или нужно искать другой патоген. Этот анализ отличается от ПЦР-теста тем, что обнаруживает не генетический материал вируса, а его белковые компоненты.

Как сейчас

На сегодня в России малярию выявляют с помощью биохимического анализа крови и экспресс-тестов, разработанных зарубежными компаниями.

• Биохимический анализ крови может показать наличие паразита в организме человека. Сложность метода в том, что забор крови необходимо производить каждые 5-6 часов на протяжении суток. Это нужно для выявления динамики заболевания. Признаками инфекции считаются, в том числе, снижение показателей эритроцитов, гемоглобина и тромбоцитов, а также повышение лейкоцитов. Также на заболевание указывают характерные симптомы – слабость, недомогание, анемия, головные боли, боли в суставах, приступы лихорадки и прочее.
• Анализ крови с микроскопией (изучением под микроскопом) позволяет обнаружить самих малярийных паразитов.
• Экспресс-тест на основе анализа крови из пальца позволяет выявить тропическую малярию, но не отрицает наличие малярии в целом. Рекомендован ВОЗ для всех пациентов с подозрением на малярию, однако используется в основном в странах, где заболевание получило массовое распространение.
• Иммуноферментный анализ‏‎ (ИФА-тест) позволяет определить наличие антител к малярии в венозной крови.
• Для исследования полимеразной цепной реакции на основе капли крови до настоящего момента существовали только зарубежные ПЦР-тесты. Их использовали, если предыдущие анализы не подтвердили заболевание.

Тест на антитела класса IgG или IgM

Чтобы определить фазу инфекции или проверить поствакцинальный иммунитет, проводятся анализы крови на выявление антител в классе IgG или IgM. В чем разница между антителами IgG и IgM?

• Антитела IgM появляются на ранней стадии инфекции, всего через несколько дней после появления симптомов, и быстро исчезают. Их наличие в крови свидетельствует об активной фазе инфекции. Определение антител IgM может быть дополнением к молекулярной диагностике на ранней стадии инфекции, в том случае, когда генетический тест дает отрицательный результат, а симптомы и эпидемиологический анамнез указывают на вероятность заражения.
• Антитела IgG появляются позже – примерно через 10 дней после появления симптомов – и сохраняются в течение длительного времени в крови. Их наличие в крови свидетельствует о прошлом контакте с вирусом (как свежим, так и старым) и знаменует собой заключительную фазу заражения и приобретения иммунитета. Именно антитела IgG являются мерой иммунитета после вакцинации.

Тесты на антитела IgG, направленные против белка S вируса Sars-CoV-2 (spike-белка), позволяют определить прошлый контакт с вирусом и вырабатываемый иммунитет, но не дифференцируют, исходит ли иммунитет от вакцинации или от болезни COVID-19.

Тем не менее ученые все еще совершенствуют существующие продукты для лабораторной диагностики. В настоящее время проводятся тесты на антитела IgG, направленные против N-белка вируса (нуклеокапидного белка). Эти антитела вырабатываются только после болезни и контакта с целой вирусной частицей, потому что в вакцинах против COVID-19 нет N-белка.

Тест на антитела IgG в крови

Наличие антител к SARS-CoV-2 – что делать?

Положительный результат теста на антитела к Sars-CoV-2 всегда следует рассматривать в контексте эпидемиологической ситуации.

Наличие антител IgG у привитого человека свидетельствует о правильной реакции организма – выработке гуморального иммунитета.

Наличие антител у человека, который не был вакцинирован, следует интерпретировать в зависимости от класса выявленных иммуноглобулинов:

• Антитела IgM у такого человека всегда должны быть подтверждены ПЦР-тестом, поскольку они могут указывать на продолжающуюся бессимптомную инфекцию. 
• Наличие антител IgG, с другой стороны, не указывает на заболевание! Они появляются после контакта с вирусом, но и сохраняются еще долго после его исчезновения из организма. 
• При отсутствии антител IgM только IgG может означать, что у человека была бессимптомная инфекция, и эта ситуация не требует дальнейшего тестирования.

Блок новостей, связанных с вакцинацией против COVID-19

Анализ крови

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.

• Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
• Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
• Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
• Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
• Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.

Информация Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 29 марта 2021 г. «О регистрации ПЦР-теста на выявление малярии»

1 апреля 2021

ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора разработал и зарегистрировал первый в Российской Федерации ПЦР-тест для диагностики малярии.

Данный тест обладает высокой аналитической чувствительностью, позволяя выявлять инфекцию даже при низком уровне инфицирования, а также в инкубационном и начальном периодах заболевания. Данный метод позволяет избежать ложноположительных результатов микроскопического анализа в случае анализа препаратов крови плохого качества или специалистом с недостаточной квалификацией.

Набор реагентов АмплиСенс

Plasmodium spp/P.falciparum/P.vivax-FL предназначен для диагностики заболеваний, вызванных группой малярийных плазмодиев (одноклеточных организмов), путем качественного определения их ДНК методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Чувствительность метода достигает 1-0,1 кл/мкл крови, что намного превосходит возможности существующих сегодня методов диагностики — световой микроскопии и экспресс-тестов. Они обладают меньшей чувствительностью, в результате чего могут давать ложноотрицательные результаты.

Набор ЦНИИ Эпидемиологии может быть использован для скрининга жителей эндемичных территорий, диагностики острой и хронической стадий заболевания при завозных случаях малярии, а также как дополнительный к микроскопии метод на эндемичных по малярии территориях.

Регистрационное удостоверение на набор реагентов АмплиСенс

Plasmodium spp/P.falciparum/P.vivax-FL получено 10 марта 2021 г., номер регистрационного досье РД-38593/103748 от 30.12.2020. Тест-система допущена к обращению на территории РФ.

Справочно

В 2020 году в Российской Федерации зарегистрировано 57 завозных случаев малярии, в январе-феврале 4 завозных случая. Малярия — группа паразитарных заболеваний человека, возбудителями которых выступают различные виды малярийного плазмодия, поражающего преимущественно эритроциты крови и ретикулоэндотелиальную систему. Заболевание широко распространено в странах Экваториальной Африки, Юго-Восточной Азии, Океании, Центральной и Южной Америки. Ежегодно в мире регистрируется около 250 млн новых инвазий и порядка полумиллиона летальных исходов от малярии. Особенно уязвимой группой в отношении малярии являются дети в возрасте до 5 лет.

ВОЗ рекомендует, чтобы все предполагаемые случаи малярии подтверждались диагностическим тестированием, основанным на выявлении паразита или его антигенов до предоставления лечения.

Какие инфекции можно диагностировать методом ПЦР

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

• гепатит C, B;
• уреаплазмоз половых органов;
• ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
• хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
• микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
• бактериальный вагиноз;
• кандидоз половых органов;
• инфекционный мононуклеоз;
• туберкулез;
• сальмонеллез;
• туберкулез (легочные и внелегочные формы);
• листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
• цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную  инфекцию;
• детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
• ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты

Это важно для тех, кто находится рядом с больным

Кто должен тестировать на антитела к SARS-CoV-2?

В принципе, противопоказаний для проведения тестов на антитела к SARS-CoV-2 нет. Но когда их следует делать?

• Когда, несмотря на выраженные симптомы заболевания, результат ПЦР-пробы отрицательный. Тогда определение антител IgM может быть диагностически полезным;
• После контакта с человеком с COVID-19 проверить, был ли контакт с вирусом (IgG и IgM);
• При подозрении на бессимптомную инфекцию, когда не проводился ПЦР-тест (IgG и IgM);
• После COVID-19 – уровень антител IgG позволит определить, выработал ли организм естественный иммунитет;
• После вакцинации против COVID-19 – для проверки эффективности иммунного ответа (IgG).

Общий тест на антитела против SARS-CoV-2 (количественно)

В диагностических лабораториях тест на общие антитела против SARS-CoV-2 (количественно) проводится методом хемилюминесценции. Для этого исследования у пациента берется венозная кровь. Тест позволяет определить уровень общих антител, выраженный в международных единицах БАУ/мл. Положительный результат, выше 0,8 BAU/мл, свидетельствует о контакте с вирусом SARS-CoV-2.

Анализ на антитела

Как и кассетный тест, исследование общих антител количественно не позволяет различать классы иммуноглобулинов. В некоторых ситуациях, однако, это лучшее решение, чем определение отдельных классов антител, потому что этот анализ имеет большую специфичность. Это означает, что если вы тестируете на общие антитела, существует меньший риск перекрестных реакций, которые могут дать ложноположительный результат. Такое происходит, например, в случае людей с аутоиммунными заболеваниями или в случаях других активных вирусных инфекций.

Точность расшифровки результатов ПЦР анализа

Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:

• Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
• Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
• Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).

Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.

Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.

Как расшифровать ПЦР анализ

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

• Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
• Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности.Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Мазок у женщин

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут мазок из влагалища. При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.

• За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
• За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
• За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
• Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
• За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.

Другие разработки российских ученых в сфере медицины в 2020 году

Российские ученые в последнее время представили несколько крупных разработок, многие из которых уже успешно зарекомендовали себя в 2020 году. Вот некоторые из них.

• Центр эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи создал вакцину от коронавируса «Спутник V», центр «Вектор» — вакцину «ЭпиВакКорона».
• Сотрудники компании «Система-Биотех», Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» в соавторстве с другими разработчиками создали высокоточный отечественный тест для диагностики коронавируса.
• Специалисты Национального исследовательского ядерного университета МИФИ создали устройство, мгновенно обнаруживающее в воздухе опасные вирусы и бактерии, даже если их концентрация составляет 10 – 20 частиц на литр воздуха. 
• Российские ученые создали новый метод диагностики и лечения предраковых состояний шейки матки. Его испытали на женщинах с лейкоплакией и дисплазией шейки матки. У всех пациенток раковые клетки были успешно уничтожены.

Фото обложки: Marijan Murat/dpa/picture-alliance/TASS

Как проводится тест ПЦР?

Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:

• Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
• Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
• Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
• Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
• Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
• Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии;соскобы и мазки со слизистых  для диагностики ЗППП;клетки слизистой желудка и желудочный сок — для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.

При одном взятии материала можно обнаружить сразу нескольких возбудителей, попавших в организм. Такая универсальность избавляет пациента от дополнительных обследований и лишних трат.Обнаружить и идентифицировать участки генетической информации удается при помощи специальных эталонных маркеров ДНК (праймеров) созданных для каждого известного возбудителя. Эталон позволяет найти «свой» фрагмент среди миллионов других. Если это происходит, запускается реакция полимеразной цепи.

ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию)

Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами.Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию

Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.

Суть метода полимеразной цепной реакции

Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК. Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах.ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов. Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.